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Identification of toxocara canis antigens by Western blot in experimentally infected rabbits Identificação de antígenos de Toxocara canis por Western blot em coelhos experimentalmente infectados

By Olga Lucía MORALES, Myriam Consuelo LÓPEZ, Rubén Santiago NICHOLLS and Carlos AGUDELO

Abstract

Toxocariasis is a frequent helminthiasis that can cause visceral and ocular damage in humans specially in children. The identification of specific antigens of Toxocara canis is important in order to develop better diagnostic techniques. Ten rabbits were infected orally with a dose of 5000 Toxocara canis embryonated eggs. Rabbits were bled periodically and an ELISA assay was performed to determine levels of specific Toxocara IgG antibodies. ELISA detected antibodies at day 15 after infection. Western blot (WB) assay was performed using excretory/secretory antigens (E/S) of T. canis second stage larvae. Different antigen concentrations were evaluated: 150, 200, 250 and 300 µg/mL. The concentration of 250 µg/mL was retained for analysis. Rabbit sera were diluted 1:100. Secondary antibody was used at a dilution of 1:1000. Results of WB indicated that in the first month after infection specific antibodies against the 200 KDa, 116 KDa, 92 KDa and 35 KDa antigens were detected; antibodies against the 92 KDa, 80 KDa, 66 KDa, 45 KDa, 31 KDa and 28 KDa antigens appeared later. All positive sera in the ELISA test were also positive in WB. Two antigen bands, 92 KDa and 35 KDa, were identified since the beginning and throughout the course of infection. These antigens merit further evaluation as candidates for use in diagnosis.<br>O Toxocara canis é responsável por uma helmintíase freqüente, causando danos viscerais e oculares no ser humano, especialmente em crianças. A identificação de antígenos específicos de Toxocara canis é importante para se obter melhores técnicas de diagnóstico. Neste trabalho, dez coelhos foram infectados, por via oral, com um inóculo de 5000 ovos embrionados de T. canis. Periodicamente, foi coletado sangue dos coelhos para determinação dos níveis de anticorpos IgG, pela técnica ELISA, que revelou anticorpos no 15º dia após a infecção. A técnica de Western blot foi realizada utilizando os antígenos excretores-secretores (E/S) com larvas de T. canis de segundo estádio. Foram avaliadas diferentes concentrações de antígeno: 150, 200, 250 e 300 µg/mL. No final, a concentração ótima de antígenos para análise foi 250 µg/mL. Cada soro foi diluído 1:100 e o anti IgG de coelho, ligado a fosfatase alcalina, fui utilizado a 1:10000. Os resultados do Western blot indicaram que no primeiro mês após a infecção apareceram anticorpos específicos contra os determinantes antigênicos 200 KDa, 116 KDa, 92 KDa e 35 KDa; os anticorpos contra 92 KDa, 80 KDa, 66 KDa, 45 KDa, 35 KDa e 28 KDa apareceram mais tarde. Todos os soros positivos pela técnica ELISA, também foram positivos pela de Western blot. Duas bandas estiveram presentes desde o começo da infecção. Estes antígenos justificam uma futura avaliação para uso no diagnóstico da Toxocaríase

Topics: Toxocara canis, Immunoblot, ELISA, Antibodies, Diagnosis, LCC:Medicine (General), LCC:R5-920, LCC:Medicine, LCC:R, DOAJ:Medicine (General), DOAJ:Health Sciences
Publisher: Instituto de Medicina Tropical
Year: 2002
DOI identifier: 10.1590/S0036-46652002000400006
OAI identifier: oai:doaj.org/article:4e442860af0c44d2bc222b98b4876395
Journal:
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