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Transient gene expression in electroporated intact tissues of Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw. Expressão transiente em tecidos intactos de Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw. via eletroporação

By Vera Maria Quecini and Maria Lúcia Carneiro Vieira

Abstract

Genetic transformation though protoplast electroporation has been established for commercially important plant species. In this work, explant sources, electric field strengths, electroporation buffers, DNA forms and osmotic pretreatment were assayed in order to optimize transient reporter gene expression in electroporated tissues of Stylosanthes guianensis, a tropical forage legume. Higher transformation rates were obtained employing cotyledonary explants and an electric field strength of 250 V cm-1. Linear plasmid DNA, chloridefree electroporation buffer and osmotic pretreatment with 1.6 mol L-1 mannitol also improved transient transformation but non-significantly. Transgene specific PCR amplification was employed to prove the transformed status of the tissues.<br>A transformação genética através da eletroporação de protoplastos foi estabelecida para espécies vegetais comercialmente importantes. Neste trabalho, fontes de explante, intensidades de campo elétrico, soluções de eletroporação, configuração da molécula de DNA e pré-tratamentos osmóticos foram avaliados para otimizar a expressão transiente do gene repórter em tecidos eletroporados de Stylosanthes guianensis, uma leguminosa forrageira tropical. Taxas elevadas de transformação foram obtidas empregando-se explantes cotiledonares e 250 V cm-1 de intensidade de campo elétrico. DNA plasmidial linear, solução de eletroporação livre de cloro e pré-tratamento osmótico com 1,6 mol L-1 de manitol favorecerem a expressão transiente do gene repórter, porém não significativamente. A amplificação por PCR específica do transgene foi usada para demonstrar a ocorrência de transformação nos tecidos

Topics: expressão de GUS, transferência direta de DNA, transformação de plantas, leguminosa forrageira, GUS expression, direct DNA transfer, plant transformation, forage legume, LCC:Agriculture (General), LCC:S1-972, LCC:Agriculture, LCC:S, DOAJ:Agriculture (General), DOAJ:Agriculture and Food Sciences
Publisher: São Paulo - Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz"
Year: 2001
DOI identifier: 10.1590/S0103-90162001000400018
OAI identifier: oai:doaj.org/article:e5220b3e89834fe296817e487b9b4c97
Journal:
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