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穿梭載體選殖於酵母菌內之表現和穩定性

By [[author]]周淑娥, SHU-E [[author]]ZHOU, 周淑娥 and SHU-E ZHOU

Abstract

[[abstract]]一般用於酵母菌基因選殖的穿梭載體,包含酵母的複製源(replication origin)如 2u,ars ,和用作篩選標誌的營養需求基因(auxotrophic gene)如leu ,trp ,與 大腸菌的質體如pBR322。本實驗利用GAPDH (glyceraldehye) 3-phosphate dehydrog enase)基因的啟動子接上HBsAB 基因構築成表現重組體pGAPL15, pGAPL25和pTYC11。 將這些重組質體選殖於酵母菌內,藉助HBsAB 來分析它們表現的能力及穩定性。 pGAPL15 和pGAPL25 轉形至Saccharomyces cerevisiae及Schizosccharomyces pombe ,而pTYC11則轉形至Saccharomyces cerevisiae。 經Radioimmunoassay (RIA)測試結果以pTHG11/YNN 27 表現力最佳。質體穩定度與套 數測試結果,仍以pTHG11/YNN 27 最穩定,顯示pTHG11比pGAPL15, pGAPL25更適於選 殖於酵母菌內。對酵母菌而言,pYE8是一種很理想的穿梭質體。 當pGAPL15和pGAPL25送入出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)與裂殖酵母(Schi zosaccharomyces pombe ),發現在裂殖酵母中表現HBsAg ,產量不高,即酵母菌的 生殖方式,對於HBsAg 基因的表現,沒有直接影響。 對酵母菌所產生的HBsAg 加以萃取、純化,得到在CsCl density gradient 的浮力密 度為1.2gcm-3而在sucrose gradient則為1.06g cm-3聚集成顆粒狀,經過SDS PAGE銀 染分析結果,其分子量約為25Kd,用電子顯微鏡來檢視HBsAg 顆粒大小約為22 nm。

Topics: 穿梭載體, 酵母菌, 複製源, 營養需求基因, 出芽酵母, 裂殖酵母, REPLICATION-ORIGIN, AUXOTROPHIC-GENE, GAPOH, SACCHAROMYCES-CEREVISIAE, SCHIZOSACCHAROMYCES-POMBE, [[classification]]40
Year: 2010
OAI identifier: oai:ir.lib.ntnu.edu.tw:309250000Q/7345
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