Efecto de las secreciones oviductales y uterinas sobre el desarrollo in vitro de embriones clones de ovis aries

Introducción: La transferencia nuclear de células somáticas (TNCS) es una biotecnología con aplicación en diferentes áreas tales, como la replicación de animales de interés zootécnico, especies silvestres amenazadas y animales transgénicos. No obstante, la TNCS no ha tenido la aplicación práctica como otras biotecnologías reproductivas, debido a factores intrínsecos de la propia técnica, tales como resistencia a la reprogramación de la célula somática, pobre potencial de reprogramación de los ovocitos, traumatismo por manipulación y condiciones subóptimas del cultivo embrionario in vitro. Por otra parte, se ha reportado que la adición de fluido oviductal (FO) y uterino (FU) en el medio de cultivo in vitro de embriones generados por FIV en diferentes especies domésticas, tiene un efecto positivo en el desarrollo y la calidad embrionaria; debido a que el FO y el FU contienen una amplia variedad de proteínas que cumplen diferentes funciones durante el desarrollo embrionario y de las cuales carecen los medios de desarrollo embrionario in vitro. El objetivo del presente estudio fue evaluar el volumen, la osmolaridad, la concentración y el patrón de distribución de las proteínas del FO y FU, e identificar las proteínas OVGP1, HSP70 y Ezrin que son importantes para la fisiología reproductiva. Una vez que se evaluaron dichas propiedades, se analizó el efecto del FO y FU en el desarrollo de embriones clones y partenogenéticos de Ovis aries, así como en el balance de especies reactivas de oxígeno (ERO) y glutatión (GSH). Resultados: Se obtuvo en promedio de 3.2±1.5 µL de FO y 17±0.5 µL de FU por aparato reproductor; la osmolaridad fue de 343 ± 20.8 mOsm kg-1 y 280 ± 96.2 mOsm kg-1 y la concentración de proteínas fue de 71.9 ± 23.8 g L-1 y 21.8 ± 1.1 g L-1 , respectivamente. En el patrón de distribución de proteínas se observaron 20 bandas en FO y 14 bandas en FU. De ellos, 14 y 8 fueron específicos de FO y FU y 6 comunes a ambas. El espectro de pesos moleculares de las proteínas fue de 24 a 324 y de 29 a 353 kDa para FO y FU. Se identificó la presencia de las proteínas OVPG1, HSP70 y Ezrin en ambos fluidos, encontrándose en mayor cantidad en el FO. No se observó efecto en el desarrollo de embriones partenogenéticos y clones con 0.5% de FO y FU. Sin embargo, al 1 y 2% de FO y FU, se observó un efecto negativo en las primeras divisiones en los embriones partenogenéticos y en la etapa de blastocisto para los embriones clones. Se observó una disminución de los niveles intracelulares de ERO y GSH en los blastocistos partenogenéticos tratados con 1.0% de FO y FU, mientras que no se observó efecto alguno en los embriones clones. Sin embargo, los embriones clones presentaron mayor concentración de GSH que los embriones partenogenéticos. Conclusiones: El volumen recuperado de FU fue 5 veces mayor que el de FO. Tanto la osmolaridad como la concentración de proteínas fueron mayores en FO que en FU (1.2 y 3 veces mayores). El patrón de distribución de proteínas entre FO y FU fue diferente, siendo más complejo en FU. Las proteínas OVGP1, HSP70 y Ezrin fueron identificadas en el FO y FU, encontrándose en mayor cantidad en el FO. No se observó efecto de los FO y FU sobre el desarrollo embrionario y el balance redox en los embriones clones de ovino generados por clonación manual.Introduction: Somatic cell nuclear transfer (SCNT) is a biotechnology with different application fields such as replication of zootechnical interest animals, endangered wildlife and transgenic animals. However, SCNT has not had the practical application like other reproductive biotechnologies, due to intrinsic factors of the technique itself, such as resistance to somatic cell reprogramming, oocytes with poor reprogramming potential, handling trauma and suboptimal conditions of embryonic culture in vitro. Moreover, it has been reported that supplementing oviductal fluid (OF) and uterine fluid (UF) during in vitro culture of IVF embryos in different domestic species has a positive effect on embryo development and quality; because OF and UF contain a wide variety of proteins which perform different functions during embryonic development and which are lacking in vitro culture medium for embryo development. The aim of this study was to evaluate the volume, osmolarity, concentration and proteins distribution pattern of OF and UF, identify the proteins OVGP1, HSP70 and Ezrin which are important for reproductive physiology. Once these properties were evaluated, the effect of OF and UF on the development of clone and parthenogenetic embryos of Ovis aries was analyzed, as well as the balance of reactive oxygen species (ROS) and glutathione (GSH). Results: An average of 3.2±1.5 µL of OF and 17±0.5 µL of UF per reproductive system was obtained; osmolarity was 343±20.8 mOsm kg-1 and 280±96.2 mOsm kg-1 and protein concentration was 71.9±23.8 g L-1 and 21.8±1.1 g L-1 , respectively. The protein distribution pattern, 20 bands in OF and 14 bands in UF were observed. Of these, 14 and 8 were specific to OF and UF and 6 were common to both. The molecular weight spectrum of proteins was 24 to 324 and 29 to 353 kDa for OF and UF. The presence of the proteins OVPG1, HSP70 and Ezrin in both fluids was identified, being in greater quantity in the OF. No effect was observed in the development of parthenogenetic embryos and clones with 0.5% OF and UF. However, at 1 and 2% of OF and UF, a negative effect was observed in the first divisions in parthenogenetic embryos and in the blastocyst stage for clone embryos. A decrease in intracellular levels of ROS and GSH was observed in parthenogenetic blastocysts treated with 1.0% OF and UF, while no effect was observed in clone embryos. However, clone embryos had higher concentrations of GSH than parthenogenetic embryos. Conclusions: The volume of UF recovered was 5 times greater than OF. Both osmolarity and protein concentration were higher in OF than in UF (1.2 and 3 times higher). The protein distribution pattern between OF and UF was different, being more complex in UF. The proteins OVGP1, HSP70 and Ezrin were identified in the OF and UF, being in greater quantity in the OF. No effect was observed of OF and UF on embryonic development and redox balance on sheep clone embryos by Handmade Cloning

Modelos matemáticos en tratamientos de cáncer mediante el uso de virus

La viroterapia oncolítica es uno de los múltiples tratamientos contra el cáncer. Los virus oncolíticos están diseñados genéticamente para eliminar células tumorales en crecimiento, basados en experimentos en ratones desnudos (ratones de laboratorio calvos que tienen la glándula del timo dañada o carecen de ella), pues estos ratones son capaces de recibir injertos tumorales sin rechazarlos. Estas modificaciones dieron lugar a una nueva terapia basada en virus para combatir el cáncer, llamada viroterapia. En este trabajo se realiza el estudio de dos modelos mediante sistemas de ecuaciones diferenciales ordinarias de un tratamiento tumoral-viral. El principal objetivo de este trabajo es el estudio de los modelos presentados en [10] y [20], del tratamiento de cáncer mediante el uso de virus oncolíticos usando dos modelos de crecimiento tumoral, el modelo de Gompertz y el modelo logístico. De esta forma, la presentación del trabajo es la siguiente. Se presentan distintos tipos de modelos de crecimiento de un tumor. Determinamos los puntos de equilibrio, así como su estabilidad lineal en el modelo donde se considera un crecimiento del tumor de tipo Gompertz. Llevamos a cabo un estudio computacional de este modelo, donde se usa el paquete computacional MatCont que permite realizar continuación numérica de puntos de equilibrio para determinar la posible existencia de bifurcaciones. Se considera un segundo modelo de tratamiento de viroterapia para el cáncer, donde el modelo de crecimiento del tumor es de tipo logístico; asimismo, se determinan los puntos de equilibrio y su estabilidad. Con la ayuda del paquete MatCont se realiza un estudio de posibles bifurcaciones donde el modelo de crecimiento del tumor considerado es de tipo logístico. Finalmente, se presentan conclusiones de este trabajo

Análisis in vitro e in silico de proteínas intracelulares con efecto antimicrobiano producidas por Pediococcus pentosaceus 1101

Lactic Acid Bacteria (LAB) are present in fermented meat products, the most representative genera are Lactobacillus and Pediococcus, which provide stability and prolong their useful life because they can produce compounds with antimicrobial activity, such as bacteriocins and bacteriocin-like inhibitory substances (BLIS), recent studies have also shown that proteins like peptidoglycan hydrolases (PHG) and ribosomal proteins exhibit antimicrobial activity. In previous work, Juárez (2019) conducted doctoral research within the W-207 Laboratory group under the supervision of Dr. Edith Ponce Alquicira at UAMIztapalapa, in which various LAB of Spanish-type chorizo were isolated. one of them was strain 1101, which demonstrated the inhibition of microorganisms associated with food spoilage and exhibited high anti-Listeria activity. The objective of this work was to identify in sillico the possible metabolites of protein origin that cause the antimicrobial effect of strain 1101. The strain under study was identified as Pediococcus pentosaceus by amplification of the 16S rRNA reference gene, with a similarity percentage of 97%. Additionally, identification was confirmed through the analysis of the protein profile using mass spectrometry (MALDI-TOF-Biotyper), providing a result of high confidence. the strain under study is named Pediococcus pentosaceus 1101. Subsequently, the antimicrobial activity against Listeria innocua was evaluated using the cell-free supernatant of the culture, as well as the intracellular fraction obtained through a mechanical disruption lysis process. The remnants of the lysed cells exhibited higher antimicrobial activity, so the analysis of the intracellular fraction was continued. Modifications were made to the optimal growth conditions of strain 1101 to assess potential variations in the antimicrobial activity of the intracellular fraction, temperatures of 30ºC and 44ºC, pH 5 and 6, and addition of 1% yeast extract to the base culture médium were tested. Lysis was performed, recovering and concentrating the proteins through precipitation with trichloroacetic acid and dithiothreitol, followed by washes with acetone. The electrophoretic profile and zymogram of the intracellular fraction, conducted on Tris-tricine polyacrylamide gels, revealed 5 bands with inhibitory activity against Micrococcus lisodeikticus, with apparent weights of 14.08, 42.83, 52.84, 70.89, and 103.42 kDa under the growth condition of 44°C. In the bioinformatic analysis, the apparent weights obtained were used to identify potential proteins associated with inhibitory activity. Proteins were searched in the NCBI database using keywords related to antimicrobial activity of peptidoglycan hydrolases (PGH) and similar weights. Subsequently, the results were filtered based on intracellular and transmembrane localization using the Psortb tool. The sequences of the chosen proteins were obtained, aligned for primer design, and then subjected to product simulation. In this exercise, proteins were searched in 33 sequenced genomes reported in NCBI for Pediococcus pentosaceus.The simulation results suggest that the proteins with antimicrobial activity belong to the M13 peptidase family, associated with various functions such as signaling and cell membrane permeabilization.Las Bacterias ácido lácticas (BAL) se encuentran presentes en alimentos fermentados de origen cárnico, los géneros más representativos son Lactobacillus y Pediococcus, que proporcionan estabilidad y prolongan su vida útil debido a que son capaces de producir compuestos con actividad antimicrobiana como las bacteriocinas y el grupo llamado sustancias inhibidoras similares a bacteriocinas (BLIS), recientemente se ha demostrado que proteínas como las peptidoglucano hidrolasas (PHG) y ribosomales presentan dicha actividad. En trabajos previos, Juárez Castelán (2019) realizó su trabajo de tesis doctoral dentro del grupo de trabajo del Laboratorio W-207 dirigido por la Dra. Edith Ponce Alquicira en la UAM-Iztapalapa, en el cual se aislaron diversas BAL de chorizo tipo español capaces de inhibir a microorganismos asociados al deterioro de alimentos, destacando la cepa Pediococcus pentosaceus 1101 que demostró una alta actividad antilisteria. Debido a que existen diversos reportes de péptidos con actividad antimicrobiana producidas por bacterias del género Pediococcus, este trabajo tuvo como objetivo identificar in silico los posibles metabolitos de origen proteico con efecto antimicrobiano secretados por la cepa de estudio. En primera instancia se corroboró la identidad de la cepa 1101 mediante la amplificación del gen de referencia 16S ARNr, con un porcentaje de similitud para Pediococcus pentosaceus superior al 97%. Asimismo, se realizó la identificación mediante el análisis del perfil proteico por espectrometría de masas (MALDI-TOFBiotyper) con un resultado de alta confianza. Posteriormente se evaluó la actividad antimicrobiana de la cepa en estudio contra Listeria innocua haciendo uso del sobrenadante libre de células del cultivo, así como la fracción intracelular obtenida a través de un proceso de lisis por disrupción mecánica. Los restos de las células lisadas mostraron mayor actividad antimicrobiana, por lo que se continuó con el análisis de la fracción intracelular. Se realizaron modificaciones a la condición óptima de crecimiento de la cepa 1101 para saber si existe una variación de la actividad antimicrobiana de la fracción intracelular, se probaron temperaturas de 30ºC y 44ºC, pH 5 y 6, y adición de 1% de extracto de levadura sobre la base del medio de cultivo. Se realizo la lisis recuperando y concentrando las proteínas por precipitación con ácido tricloroacético y ditiotreitol, seguido de lavados con acetona. El perfil electroforético y zimograma de la fracción intracelular realizada en geles de poliacrilamida Tris-tricina mostraron 5 bandas con actividad inhibitoria contra Micrococcus lisodeikticus con pesos aparentes de 14.08, 42.83, 52.84, 70.89 y 103.42 kDa en la condición de crecimiento de 44ºC En el análisis bioinformático los pesos aparentes obtenidos se usaron para identificar las posibles proteínas asociadas a la actividad inhibitoria, se buscaron proteínas reportadas en la base de datos de NCBI mediante palabras clave asociadas con actividad antimicrobiana de PGH y similares al peso, para después filtrar por localización intracelular y transmembranal haciendo uso de la herramienta Psortb. Se obtuvieron las secuencias de las proteínas elegidas, se les realizó un alineamiento para el diseño de primers y posterior simulación de productos, para este ejercicio se buscaron las proteínas en 33 genomas secuenciados y reportados en NCBI de Pediococcus pentosaceus. Los resultados obtenidos de la simulación siguieren que las proteínas con actividad antimicrobiana pertenecen a la familia de peptidasas M13 asociadas con diversas funciones de señalización y permeabilización de membrana celula

Percepción de la enseñanza de las matemáticas en la Licenciatura de Administración

En esta investigación, se hace una descripción de la percepción que tienen los estudiantes sobre la enseñanza de las matemáticas en la Licenciatura de Administración en la Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Iztapalapa; se realiza una investigación cuantitativa para identificar cuáles son los conocimientos matemáticos en los que los estudiantes tienen mayor dificultad/facilidad, cuál ha sido su experiencia con los contenidos matemáticos que han estudiado y para saber si es que reconocen la importancia del estudio de las matemáticas así como su aplicación en el campo profesional, teniendo como referencia los datos correspondientes de los últimos 5 años sobre los índices de aprobación, reprobación y renuncias de las Unidades de Enseñanza y Aprendizaje (UEA) con alto contenido matemático. Se concluye con que los estudiantes tienen una satisfactoria percepción sobre la enseñanza de las matemáticas en la licenciatura y aunque reconocen la importancia para la aplicación en el campo laboral, creen que se podría mejorar en la inclusión de más temas matemáticos que puedan ayudarlos a poner en práctica los conocimientos obtenidos. Palabras clave: Matemáticas, Administración, Proceso de enseñanza – aprendizajeIn this research describes the perception that students have about the teaching of mathematics in the Bachelor of Administration at the Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Iztapalapa; A quantitative investigation is carried out to identify which mathematical knowledge students have greater difficulty/easiness in, what their experience has been with the mathematical contents they have studied and to know if they recognize the importance of studying mathematics as well as its application in the professional field, taking as reference the corresponding data from the last 5 years on the approval, failure and resignation rates of Teaching and Learning Units with high mathematical content. It is concluded that the students have a satisfactory perception about the teaching of mathematics in the degree and although they recognize the importance for the application in the work field, they believe that it could be improved by including more mathematical topics that can help them put into practice the knowledge obtained. Key Words: Mathematics, Administration, Teaching-learning process

Evaluación probiótica y funcional de bacterias de la familia Lactobacillaceae aisladas del pulque

El pulque es una bebida alcohólica tradicional mexicana no destilada a la que se le atribuyen diversas funciones benéficas, principalmente asociadas con la salud gastrointestinal, lo que puede explicarse por la presencia de microorganismos probióticos en su microbiota. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar la inocuidad, actividad probiótica y características funcionales de siete cepas de bacterias ácido lácticas (BAL) aisladas del pulque, utilizando como control la cepa probiótica Lactobacillus acidophilus NCFM. Las BAL aisladas se identificaron mediante la secuenciación del gen 16S ARNr y espectrometría de masas MALDI Biotyper® como pertenecientes a tres géneros y especies diferentes de Lactobacillaceae: Lactiplantibacillus plantarum, Levilactobacillus brevis y Lacticaseibacillus paracasei. La mayoría de las cepas mostraron resistencia a condiciones simuladas de jugo gástrico, jugo intestinal y a la presencia de lisozima (10 mg/L). Además, todas las cepas mostraron actividad hidrolasa de sales biliares (BSH) y actividad antibacteriana frente a la cepa patógena Listeria monocytogenes. Además, se evaluaron las características de la superficie celular de las BAL, y la mayoría de las cepas mostraron buena hidrofobicidad, autoagregación y coagregación con Escherichia coli enteropatógena, Listeria monocytogenes y Salmonella enterica serovar Typhi. En términos de seguridad, la mayoría de las cepas fueron sensibles a los antibióticos ensayados y sólo la cepa Lact. paracasei UTMB4 amplificó un gen relacionado con la resistencia a los antibióticos (mecA). ). Las cepas Lact. plantarum RVG2 y Lact. plantarum UTMB1 presentaron actividad γ-hemolítica, y la presencia del gen agg relacionado con la virulencia sólo se identificó en la cepa Lact. plantarum UTMB1. Basándose en el análisis de componentes principales (ACP) y el mapa de calor, y considerando la cepa Lact. acidophilus NCFM como referencia probiótica, las cepas Lacticaseibacillus paracasei UTMB4, Lactiplantibacillus plantarum RVG4 y Levilactobacillus brevis UTMB2 fueron seleccionadas como las cepas con potencial probiótico más prometedoras. Los resultados de este estudio destacaron los rasgos probióticos, funcionales y de seguridad de las BAL aisladas del pulque, apoyando así los beneficios para la salud atribuidos a esta bebida ancestral.Pulque is a traditional Mexican non-distilled alcoholic beverage to which several beneficial functions are attributed, mainly associated with gastrointestinal health, which can be explained by the presence of probiotic microorganisms in its microbiota. Therefore, the objective of this work was to evaluate the safety, probiotic activity, and functional characteristics of seven strains of lactic acid bacteria (LAB) isolated from pulque using the probiotic strain Lactobacillus acidophilus NCFM as control. The LAB isolates were identified by 16S rRNA gen sequencing and MALDI Biotyper® MS as belonging to three different Lactobacillaceae genera and species: Lactiplantibacillus plantarum, Levilactobacillus brevis and Lacticaseibacillus paracasei. Most strains showed resistance to gastric juice, intestinal juice and lysozyme (10 mg/L). In addition, all strains exhibited bile salt hydrolase (BSH) activity and antibacterial activity against the pathogenic strain Listeria monocytogenes. Additionally, cell surface characteristics of LAB were evaluated, with most strains showing good hydrophobicity, auto-aggregation, and co-aggregation with enteropathogenic Escherichia coli, L. monocytogenes and Salmonella enterica serovar Typhi. In terms of safety, most of the strains were sensitive to the tested antibiotics and only the Lact. paracasei UTMB4 strain amplified a gene related to antibiotic resistance (mecA). The strains Lact. plantarum RVG2 and Lact. plantarum UTMB1 presented γ-hemolytic activity, and the presence of the virulence-related gene agg was identified only in UTMB1 strain. Regarding the functional characterization, the tested bacteria showed good β-galactosidase activity, antioxidant activity and cholesterol reduction based on principal component analysis (PCA) and heat mapping, and considering the strain Lact. acidophilus NCFM as the probiotic reference, the strains Lacticaseibacillus paracasei UTMB4, Lactiplantibacillus plantarum RVG4 and Levilactobacillus brevis UTMB2 were selected as the most promising probiotic potential strains. The results of this study highlighted the probiotic, functional and safety traits of LAB strains isolated from pulque thus supporting the health benefits attributed to this ancestral beverage

Análisis de textura e intensidad de imágenes PET/CT de pacientes diagnosticados con trastornos de movimiento

Los trastornos de movimiento se definen como un conjunto de síndromes de tipo neurológico, que ocasionan movimientos anormales. Los trastornos de movimiento son una de las principales causas de discapacidades neurológicas en los adultos mayores; la enfermedad de Parkinson (PD, por sus siglas en inglés), uno de los trastornos de movimiento más comunes, es la segunda enfermedad neurodegenerativa más frecuente en personas mayores de 50 años. El diagnóstico de los trastornos de movimiento se realiza principalmente, mediante la evaluación clínica de los síntomas del paciente. Realizar un diagnóstico preciso resulta difícil debido a la similitud y coincidencia de los síntomas que se presentan en diferentes trastornos de movimiento y en otras enfermedades neurodegenerativas. Es necesario establecer métodos de diagnóstico que utilicen medidas cuantitativas robustas y objetivas, que funcionen como biomarcadores, y que faciliten al médico especialista establecer diagnósticos diferenciados y precisos tanto de la enfermedad, como del estadio en el que se encuentra el paciente. En la presente investigación se propone realizar un análisis de imágenes de tomografía por emisión de positrones (PET, por sus siglas en inglés) de participantes diagnosticados con trastornos de movimiento, utilizando el método de radiómica, un método de un análisis de imágenes que aporta medidas cuantitativas de intensidad, textura y de forma. Para evaluar si la radiómica tiene el potencial de ser utilizada para estudiar trastornos de movimiento, se realizó una prueba de principio en la cual, se analizó si los valores obtenidos mediante el análisis de radiómica permiten establecer correlaciones con valores correspondientes a escalas clínicas utilizadas para determinar el estadio y el diagnóstico del participante. Los resultados fueron comparados con resultados de correlaciones entre escalas clínicas y los resultados del análisis por cocientes, el método de análisis de imágenes PET/CT más utilizado en la práctica clínica. Los resultados obtenidos a partir del análisis estadístico sugieren que el análisis de radiómica podría ser una herramienta útil para el estudio de los diferentes trastornos de movimiento. Andemás, una de las ventajas principales del el análisis de radiómica es que la segmentación se puede realizar de manera semi-automática, lo que la convierten en una técnica de análisis usuario independiente y reproducible, a diferencia del análisis por cocientes, que requiere del trazado manual de las regiones de interés en el cuerpo estriado.Movement disorders can be defined as neurologic syndromes distinguished by abnormal movements, movement disorders are one of the leading causes of neurological disabilities amongst the elderly; Parkinson`s disease (PD) one of the most common types of movement disorders, is the second most frequent neurodegenerative decease amongst people over the age of 50. Movement disorders are diagnosed with a clinical evaluation of the patient’s symptoms; due to the similarity on the symptoms present in different movement disorders and other neurodegenerative diseases, a precise diagnosis is hard to achieve, therefore it is important to develop objective parameters that can be used as biomarker to enable a more precise diagnosis. This project suggests the possibility to analyze positron emission tomography (PET/CT) images of patients diagnosed with movement disorders using radiomics, an image analysis method that offers quantitative measurements based on intensity, texture and shape. To asses whether this image analysis method is suitable to study movement disorders a proof of principle was made analyzing if the results from the radiomics analysis could be correlated with values obtained from clinical scales. The results where then compared to correlations between the values from the clinical scales and quantitative values form the tissue to ratio analysis, one of the most frequent methods used to quantify PET/CT images. The results obtained from this analysis suggests that radiomics may be a useful tool to study and assist the diagnosis of movement disorders