Biomedical Chemistry - Research and Methods (E-Journal)
Not a member yet
    130 research outputs found

    β1-адренорецептор, солюбилизированный в форме нанодисков: скрининг различных амфипатических полимеров

    Get PDF
    The development of a reliable and easily used diagnostic test for measuring autoantibodies to β1-adrenergic receptor (β1ADR Ab) in patient blood is an unmet clinical need. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is considered as the most appropriate method for this task. In ELISA, the use of peptides corresponding to various fragments of amino acid sequence of β1ADR as antigens leads to inadequate results as β1ADR Ab appear to recognize conformationally dependent epitopes that are generated during the formation of unique tertiary structure of the receptor. Isolation of β1ADR preserving the native conformation and functional characteristics is a quite challenging task. A promising approach to address this task is the use of amphipatic polymers capable of forming nanodiscs, it permits to successfully solubilize membrane proteins. In order to obtain the preparations of solubilized β1ADR that can be used as antigens in ELISA we have tested 17 various amphipatic polymers. The best relative solubilization values (RSV) were obtained using UltrasoluteTM Amphipol 17 (87%) and 18 (62%), as well as by AASTY 11-45 (76%), 11-50 (77%) and 6-50 (78.5%).Создание надежного и удобного в использовании диагностического теста для определения в крови пациентов аутоантител к β1‑адренорецептору (АДРБ1 АТ) является насущной потребностью клинической практики. Формат иммуноферментного анализа (ИФА) представляется наиболее подходящим для решения этой задачи. Использование в ИФА в качестве антигена пептидов, воспроизводящих отдельные фрагменты аминокислотной последовательности АДРБ1, приводит к неадекватным результатам, поскольку, по-видимому, АДРБ1 АТ узнают конформационно-зависимые эпитопы, образующиеся при формировании уникальной третичной структуры рецептора. Выделение АДРБ1, сохраняющего нативную конформацию и функциональные свойства, является весьма сложной задачей. Перспективным способом ее решения является использование амфипатических полимеров, формирующих нанодиски, что позволяет успешно солюбилизировать мембранные белки. В настоящей работе описаны результаты тестирования 17 различных амфипатических полимеров с целью получения препаратов солюбилизированных АДРБ1, пригодных для использования в ИФА в качестве антигена. Наилучшие условные показатели солюбилизации (УПС) продемонстрировали UltrasoluteTM Amphipol 17 (87%) и 18 (62%), AASTY 11-45 (76%), 11-50 (77%), 6-50 (78.5%)

    Сравнительный анализ протеомного профиля кератиноцитов HaCaT с использованием 1DE-гель концентрирования

    Get PDF
    Using tandem mass spectrometry with electrospray ionization, a comparative analysis of HaCaT keratinocyte proteins was carried out before and after exposure of cells to sodium dodecyl sulfate (25 mg/ml) for 48 hours; proteins encoded by human chromosome 18 genes were chosen as the comparison proteins. A total of 2418 proteins were detected in the HaCaT immortalized human keratinocytes, 70% of these proteins were identified by two or more unique peptides. Panoramic mass spectrometry analysis identified 38 proteins encoded by chromosome 18 genes, 27 proteins were common to control HaCaT cells and HaCaT cells exposed to SDS. Using the Metascape database (https://metascape.org), an enrichment analysis of GO terms of the Biological Process category of chromosome 18 gene encoded proteins of HaCaT keratinocytes was performed before and after the SDS exposure. The SDS exposure resulted in a slight enrichment of the GO term "response to stimulus" (GO:0050896) and the related GO term "negative regulation of biological process" (GO:0048519). We found decreased expression levels of membrane proteins encoded by chromosome 18 genes related to cell-cell adhesion (GO:0098609), such as DSC1, DSC3, and DSG1. A decrease in the expression level of desmosomal cadherins is characteristic of malignant neoplasms developing from epithelial tissue cells of various internal organs, mucous membranes, and skin. The method of preparation of HaCaT keratinocyte samples used in this work increased the sensitivity of proteomic analysis of cell culture and made it possible to identify twice as many proteins in one gel strip as compared to the number of proteins (1284) in HaCaT samples subjected to osmotic shock and cleavage by trypsin in solution.Проведена оценка протокола пробоподготовки образцов клеточной культуры кератиноцитов, основанного на солюбилизации белков в присутствии 0.2% додецилсульфата натрия (SDS), процедуре 1DE-гель концентрирования (SDS-PAGE без фракционирования в разделяющем геле) и расщеплении трипсином в геле для углубленного протеомного анализа кератиноцитов НаСаТ в одной полосе белка. С помощью тандемной масс-спектрометрии с электроспрейной ионизацией (LC-MS/MS) проведен сравнительный анализ белков кератиноцитов НаСаТ до и после воздействия SDS в субтоксической дозе (25 мг/мл) в течение 48 ч. В качестве белков сравнения выбраны белки, кодируемые генами хромосомы 18 человека. Всего в иммортализованных кератиноцитах человека линии НаСаТ обнаружено 2418 белков, из них около 70% идентифицировано по двум и более уникальным пептидам. По результатам панорамного масс-спектрометрического анализа удалось идентифицировать 38 белков, кодируемых генами хромосомы 18; из них 27 белков были общими для контрольных клеток и клеток НаСаТ, подвергнутых воздействию SDS. С использованием базы данных Metascape был проведен анализ обогащения терминами онтологии генов (GO) категории биологические процессы (biological process) белков хромосомы 18 кератиноцитов НаСаТ до и после воздействия SDS. Обработка клеточной культуры SDS приводила к незначительному обогащению GO термина “ответ на стимул” (GO:0050896 - response to stimulus) и связанного с ним GO термина “негативная регуляция биологических процессов” (GO:0048519 - negative regulation of biological process). Было обнаружено снижение уровня экспрессии мембранных белков, кодируемых генами хромосомы 18, относящихся к межклеточной адгезии (GO:0098609 - cell-cell adhesion), таких как DSC1, DSC3 и DSG1. Снижение уровня экспрессии десмосомальных кадгеринов характерно для злокачественных новообразований, развивающихся из клеток эпителиальной ткани различных внутренних органов, слизистых оболочек, кожи. Примененный в работе способ подготовки образцов кератиноцитов НаСаТ позволил идентифицировать в одной полосе геля в два раза больше белков по сравнению с образцами НаСаТ, подвергнутыми осмотическому шоку и расщеплению трипсином в растворе

    Идентификация рибосомных футпринтов на электрофоретическом геле при профилировании транслатома: использование ДНК-маркёров

    No full text
    The commercial DNA ladder was tested as a substitute for RNA size standards to identify ribosomal footprints (RNA fragments of about 30 nucleotides long) on an electrophoretic polyacrylamide gel for the purposes of translatome profiling. It has been found that 25 and 35 nucleotides long synthetic RNA oligonucleotides do migrate slower than the synthetic DNA oligonucleotides of the matching length and sequences and their positions on the gel coincide with those of 30 and 40 nucleotides long DNA oligonucleotides, correspondingly, of the commercial IDT 20/100 DNA oligo length standards. By using this DNA ladder and RNA isolated from the preparation enriched in ribosomes (obtained by fractionating on MicroSpin S-400 columns the HepG2 cell lysate treated with RNase I), the position of a band of putative ribosomal footprints can be identified on a gel that has been verified by measuring in an RNA-seq experiment the length of RNA fragments extracted from the band.Коммерческие ДНК-маркёры тестировали как замену РНК-стандартов длины молекулы для идентификации рибосомных футпринтов (фрагментов РНК длиной около 30 нуклеотидов) на электрофоретическом полиакриламидном геле при профилировании транслатома. Было обнаружено, что синтетические РНК-олигонуклеотиды длиной 25 и 35 нуклеотидов мигрируют медленнее, чем синтетические ДНК-олигонуклеотиды соответствующей длины и последовательностей, и их положение на геле совпадает с положением ДНК- олигонуклеотидов длиной 30 и 40 нуклеотидов соответственно из коммерческого набора стандартов длин ДНК-олигонуклеотидов «IDT 20/100 DNA oligo length standards». Используя данный набор и РНК, выделенную из препарата, обогащенного рибосомами (полученного фракционированием на колонках MicroSpin S-400 клеточного лизата HepG2, обработанного РНКазой I), можно идентифицировать положение полосы предполагаемых рибосомных футпринтов на геле, что было подтверждено измерением длины фрагментов РНК, выделенных из полосы, при проведении их секвенирования методом RNA-seq

    Высокопроизводительный скрининг с помощью оптического SPR-биосенсора низкомолекулярных соединений на взаимодействие с CYP51 Candida krusei

    Get PDF
    The opportunistic fungus Candida krusei is the causative agent of nosocomial infections characterized by high mortality and development of resistance to drugs of the azole class. Therefore, develjoment of non-azole antifungal agents against resistant fungal strains is extremly important. Lanosterol 14-alpha demethylase (CYP51) is a well-known antifungal target. The optical SPR biosensor is a universal tool for screening studies in search of new drug prototypes. This paper presents the methodological aspects of high-hroughput SPR based screening of a library of low molecular weight compounds of natural origin for their interaction with C. krusei CYP51. It has been shown that when performing high-throughput screening, a researcher should pay special attention to the degree of a sensorgram curvature in the association phase. The described approaches to the analysis of high throughput screening data can be useful for researchers working with SPR biosensors from various manufacturers.Условно-патогенный гриб Candida krusei (C. krusei) является возбудителем нозокомиальных инфекций, характеризующихся высокой летальностью. В последнее время наблюдается тенденция к увеличению доли штаммов дрожжевых грибов, резистентных к препаратам класса азолов. Поэтому поиск потенциальных противогрибковых соединений неазольной природы является актуальным направлением исследований при разработке новых эффективных терапевтических средств в отношении резистентных штаммов грибов. Ланостерол 14-альфа деметилаза (CYP51) является широко известной мишенью для противогрибковых средств. Оптические SPR-биосенсоры представляют собой универсальный инструмент для скрининговых исследований, целью которых является поиск прототипов новых лекарственных соединений. В данной работе представлены методические аспекты высокопроизводительного скрининга библиотеки низкомолекулярных соединений природного происхождения, направленного на установление их взаимодействия с CYP51 C. krusei с использованием SPR-биосенсора. Как показывают результаты, при проведении высокопроизводительного скрининга особое внимание следует обращать на степень выраженности наклона сенсограммы взаимодействия в фазе ассоциации. Описанные подходы к анализу данных высокопроизводительного скрининга могут быть полезны исследователям, работающим с SPR-биосенсорами различных моделей

    Генерация супероксида никотинамидными коферментами

    Get PDF
    Nicotinamide coenzymes can generate superoxide radicalsin alkaline environment. Their formation was registered by reduction of nitroblue tetrazolium (NBT) present in the buffer with formation of diformasan. Inhibition of diformazan formation occurs when superoxide dimutase (SOD) is added to the system, thus confirming generation of O₂─●. The highest superoxide generating activity was observed with NADPH. In the case of NADPH and NADH, the rate of superoxide generation was significantly lower (by approximately 50%). No O₂─● was detected when NAD was used under the same conditions and in the same time; however, 4 h later, diformasan was detected in the same sample. The superoxide generating activity decreased in the following order: NADPH > NADH ≥ NADP > NAD. Other compounds tested (adenosine, ADP and ATP) did not generate superoxide radicals even after prolonged incubation. In a cell, where a local changes in the pH of the environment are possible, nicotinamide coenzymes can be potential sources of O₂─● and thus participate in cell signaling. A change in pH can initiate this process.Никотинамидные коферменты в щелочной среде генерируют супероксидные радикалы (О₂─●), которые обнаруживаются присутствующим в буфере нитросиним тетразолием (НСТ) по регистрации продукта восстановления НСТ диформазана. Ингибирование образования диформазана происходит при добавлении в систему супероксиддимутазы (СОД), что подтверждает возникновение О₂─●. Наиболее активная генерация происходит при использовании NADPH. При использовании NADP и NADH скорость генерации значительно снижена (приблизительно на 50%). При использовании NAD при тех же условиях и за то же время образование О₂─● обнаружено не было, однако через 4 ч в этой же пробе был выявлен диформазан. Ряд активности, выстроенный по скорости генерации супероксида, имеет вид: NADPH > NADH ≥ NADP > NAD. Другие исследованные вещества (аденозин, ADP и ATP) не обладали способностью генерировать супероксид даже на протяжении длительного времени. В клетке, где возможно локальное изменение рН среды, никотинамидные коферменты могут быть потенциальными источниками О₂─● и, таким образом, участвовать в клеточной сигнализации. Изменение рН может инициировать этот процесс

    Использование праймеров с высокой степенью мечения в полимеразной цепной реакции

    No full text
    The fluorescently-labeled DNA is widely used in various bioanalytical applications. For a number of applications, a high level of labeling could be beneficial. One of the ways to produce DNA fragments bearing multiple fluorescent tags is to use polymerase chain reaction (PCR) with primers heavily labeled with fluorophores. Here we tested how primers with multiple fluorescein tags perform in PCR. It has been found that the positioning of fluorescein tags at or near the 3′-end upon primer multiple labeling can inhibit DNA amplification (up to a complete stop when tags are placed at the 3′- or adjacent nucleotide). The mechanism, by which the presence of fluorescein tags at or near the primer 3′-end affects the PCR performance, is rather ambiguous and can involve both a steric hindrance for polymerase binding from the fluorescein moiety, as well as destabilization of a primer-template duplex. Nonetheless, if multiple fluorescein tags are attached so that at least three nucleotides from the primer 3′-end are unmodified, the production of DNA fragments bearing multiple fluorescein molecules is possible even if both primers are heavily labeled, though on the expense of amplicon yield.Флуоресцентно-меченую ДНК широко используют в различных биоаналитических приложениях. В ряде случаев высокий уровень меченья ДНК является преимуществом. Одним из способов получения фрагментов ДНК, несущих множественные флуоресцентные метки, является использование полимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймерами с высокой степенью мечения. В данной работе мы исследовали, как присутствие многочисленных молекул флуоресцеина, прикреплённых к праймеру, влияет на результат ПЦР. Было обнаружено, что расположение флуоресцеиновой метки на 3′-конце праймера или вблизи него может ингибировать амплификацию (вплоть до полной остановки, когда метка находится непосредственно на 3′-концевом или соседнем с ним нуклеотиде). Механизм, посредством которого присутствие флуоресцеиновых меток на 3’-конце праймера или вблизи него влияет на эффективность ПЦР, довольно неоднозначен и может включать как стерическое препятствование связыванию полимеразы прикреплённой молекулой флуоресцеина, так и дестабилизацию дуплекса праймер-матрица. Тем не менее, если множественные флуоресцеиновые метки прикреплены к нуклеотидам праймера таким образом, что по меньшей мере три нуклеотида с его 3′-конца остаются немодифицированными, то получение фрагментов ДНК с высоким уровнем мечения возможно с помощью ПЦР, хотя и с заметно меньшим выходом, чем при использовании немодифицированных праймеров

    Прямая детекция микроРНК mir-34a, -145 и -218 с помощью CRISPR/Cas13a-нуклеазы

    No full text
    Using CRISPR/Cas13a-nuclease we have demonstrated a feasibility of direct detection of three miRNAs, miR-34a, -145, and -218 (their molecular signature is suggested as a diagnostic and prognostic biomarker in cervical cancer),. The detection is based on registration of a cleavage of molecular reporters bearing a fluorophore and a quencher by the complex of CRISPR/Cas13a-nuclease and guide RNA (gRNA) with a spacer of 21-23 nucleotides long. The detection sensitivity varied among miRNAs tested by 10-fold, presumably due to the unwanted intramolecular partial base paring of gRNA. The miRNA detection with Cas13a nuclease strongly depended on the presence of background RNA thus potentially compromising its direct application to complex media in a general case. Further optimization of measurement conditions including probably an additional amplification of the signal generated by collateral activity of Cas13a nuclease is necessary to directly detect miR-34a, -145, and -218 in biological samples.Показана возможность прямой детекции трех микроРНК, miR-34a, -145 и -218 (чья молекулярная сигнатура предлагается как диагностический и прогностический биомаркер при раке шейки матки), с помощью CRISPR/Cas13a-нуклеазы. Детекция основано на регистрации расщепления молекулярных «репортеров» – коротких РНК-олигонуклеотидов, несущих флуорофор и гаситель – комплексом CRISPR/Cas13a-нуклеазы и направляющей РНК (нРНК) со спейсером длиной 21-23 нуклеотида. Чувствительность обнаружения варьировала 10-кратно среди тестированных микроРНК, предположительно из-за нежелательного внутримолекулярного частичного спаривания оснований нРНК. Обнаружено, что детекция микроРНК с помощью нуклеазы Cas13a сильно зависит от присутствия фоновой РНК, что в общем случае может затруднить такую детекцию в сложном матриксе. Дальнейшая оптимизация условий измерения, включая, вероятно, дополнительное усиление сигнала, генерируемого коллатеральной активностью нуклеазы Cas13a, необходима для прямой детекции miR-34a, -145 и -218 в биологических образцах

    Влияние присоединения сRGD пептида к фосфолипидным наночастицам с включенным доксорубицином на апоптоз в клетках глиобластомы in vitro

    Get PDF
    One of the methods of treating glioblastoma after surgery is chemotherapy; the drugs used in this case, due to their nonspecific distribution, lead to a number of complications. One way to overcome this drawback is to supply drugs with delivery systems with targeted molecules. This approach allows increasing the accumulation of therapeutic agents directly at the lesion site, minimizing side effects. This work is a continuation of the study of the mechanism of action of the previously obtained phospholipid composition of doxorubicin with a targeted cRGD peptide (NPh-Dox-cRGD). This peptide is capable of selectively interacting with integrin αvβ3, a receptor expressed on the surface of a number of tumor cells, including glioblastoma. The work assessed the cytotoxic effect of the NPh-Dox-cRGD composition in comparison with the free substance (Dox) and embedded in phospholipid nanoparticles without a targeted ligand (NPh-Dox). It was shown that after 24 h of incubation of U-87 MG cells with substances at the maximum concentration of Dox (30 μg/ml), the percentage of viability cells was 6% for Dox, 21% for NPh-Dox-cRGD, and 21% for NPh-Dox – 17%, i.e. When Dox was incorporated into phospholipid NPs, its cytotoxic effect was observed to a lesser extent. No statistically significant differences were noted in the control line HeLa. Assessment of tumor cell death using flow cytometry indicated that most of the cells died via apoptosis. When incubated with a composition containing a targeting peptide, NPh-Dox-cRGD, at a concentration (Dox) of 0.5 μg/ml, the percentage of cells susceptible to late apoptosis was 29.7%, for the free form – 24.4%. An assessment of cells susceptible to early apoptosis (Dox concentration 0.5 μg/ml) showed that the percentage of these cells for the sample with the peptide was higher and amounted to 11.4%.Одним из методов лечения глиобластомы после хирургического вмешательства является химиотерапия. Используемые при этом препараты ввиду их неспецифического распределения приводят к ряду осложнений. Одним из способов преодоления данного недостатка является снабжение лекарств системами доставки с адресными молекулами. Это способствует накоплению терапевтических агентов непосредственно в очаге поражения и минимизирует побочные проявления. В данной работе исследовали влияние фосфолипидной композиции доксорубицина с адресным сRGD пептидом (NPh-Dox-cRGD), который селективно взаимодействует с интегрином αvβ3 на поверхности ряда опухолевых клеток, включая клетки глиобластомы. Сравнительная оценка цитотоксического действия свободной субстанции (Dox), композиции NPh-Dox-cRGD и Dox, встроенной в фосфолипидные наночастицы без адресного лиганда (NPh-Dox), показала, что при встраивании в фосфолипидные наночастицы Dox проявляет цитотоксическое действие в меньшей степени. Через 24 ч инкубации клеток U-87 MG с веществами в максимальной концентрации по Dox (30 мкг/мл) процент живых клеток составлял для Dox – 6%, для NPh-Dox-cRGD – 21% и для NPh-Dox – 17%. На контрольной клеточной линии HeLa статистически значимых различий отмечено не было. Оценка гибели опухолевых клеток с помощью метода проточной цитометрии указывала на то, что большая часть клеток погибала по пути апоптоза. При инкубации с композицией, содержащей адресный пептид, NPh-Dox-cRGD, в концентрации (по Dox) 0.5 мкг/мл процент клеток, подверженных позднему апоптозу, составлял 29.7%, для свободной формы – 24.4%. Оценка клеток, подверженных раннему апоптозу (концентрация по Dox 0.5 мкг/мл) показала, что процент данных клеток для образца с пептидом был выше и составлял 11.4%

    Исследование коллагена I типа методом иммуноблоттинга в образцах костнопластических биоматериалов

    Get PDF
    The type I collagen was studied in samples of two types of osteoplastic materials produced in the Biotech Research Institute of the Samara State Medical University using immunoblotting. The demineralized samples used in the work were compact bone powder and crushed material of human cancellous bone tissue. Collagen and its polypeptides were separated in a 5% polyacrylamide gel with 3.6 M urea according to the method of Hayashi and Nagai (1979). The advantage of the method is the separation under these conditions of type I and III collagen, as well as the α1(I) and α2(I) chains of type I collagen. Immunoblotting was carried out by diffusion method according to the method of Towbin et al. (1979) using nitrocellulose membranes (Santa Cruz, USA). Primary goat polyclonal antibodies to denatured collagen, 1:500 dilution (Millipore) were used. Peroxidase-conjugated secondary antibodies (mouse vs. goat), 1:80000 dilution (Sigma) were used also. It has been established that the bulk of the compact bone protein is localized between the α1- and α2-fractions of collagen. In samples of cancellous bone tissue, a molecular reduction of the protein is noted. Protein macromolecules with a gradually decreasing molecular weight and low molecular weight polypeptides migrating in the gel with a wide front up to the indicator line are detected. Due to the low specificity of osteoblast integrins in regenerating bone tissue, collagen polypeptides, as well as protein molecules retained in implants, can act as inducers of synthetic processes occurring in osteoblast nuclei. Protein fragmentation products in the implant can act as signaling molecules that trigger cascades of enzymatic reactions and intracellular signaling pathways.С помощью иммуноблоттинга исследовали коллаген I типа в образцах двух видов костнопластических материалов, производимых в Научно-исследовательском институте биотехнологий Самарского государственного медицинского университета. В работе использовали деминерализованные образцы: порошок компактной кости и измельченный материал губчатой костной ткани человека. Коллаген и его полипептиды разделяли в 5 полиакриламидном геле с 3.6 М мочевиной по методу Hayashi, Nagai (1979). Преимуществом метода является разделение в этих условиях коллагена I и III типа, а также цепочек α1(I) и α2(I) коллагена I типа. Иммуноблоттинг осуществляли диффузионным способом по методу Towbin и соавт. (1979) с использованием нитроцеллюлозных мембран. Установлено, что основная масса белка компактной кости локализована между α1- и α2- фракциями коллагена. В образцах губчатой костной ткани отмечена молекулярная редукция белка. Выявлены макромолекулы белка с постепенно уменьшающейся молекулярной массой и низкомолекулярные полипептиды, мигрирующие в геле широким фронтом вплоть до линии индикатора. В силу низкой специфичности интегринов остеобластов регенерирующей костной ткани полипептиды коллагена, а также сохраняющиеся в имплантатах молекулы белка, могут проявлять себя в качестве индукторов синтетических процессов, протекающих в ядрах остеобластов. В таком случае полипептиды коллагена можно рассматривать как сигнальные молекулы, запускающие каскады ферментативных реакций и внутриклеточные сигнальные пути

    Усовершенствование экзонового метода для ускоренного получения кДНК гена реналазы крысы

    Get PDF
    We have improved our previously developed method of exon cloning of cDNA of eukaryotic genes to obtain the rat renalase gene cDNA. In contrast to the previously used step-by-step pairwise assembly of exons, in this work the procedure of full-length cDNA preparation was shortened due to simultaneous assembly of four neighboring exons at once (exons 1-4 and exons 6-9 of the rat renalase gene). The two obtained sequences (exons 1-4 and 6-9) were combined into a full-length cDNA of the rat renalase gene. The cDNA synthesized in this way was cloned into the prokaryotic vector pET-28a(+), which was then expressed in E. coli cells. The correctness of this approach was confirmed by sequencing resultant cDNA sequencing, which showed full (100%) identity with the nucleotide sequence available in the GenBank database (accession code: GenBankNM_001014167).Усовершенствован ранее разработанный нами метод экзонового клонирования кДНК эукариотических генов для получения кДНК гена реналазы крысы. В отличие от ранее использованного постадийного парного объединения экзонов, в данной работе процедура получения полноразмерной кДНК была сокращена за счет того, что мы использовали объединение сразу четырех соседних экзонов (1-4 и 6-9 гена крысы). Две полученные последовательности (экзонов 1-4 и 6-9) объединяли в полноразмерную кДНК гена реналазы крысы. Синтезированную таким образом кДНК клонировали в прокариотический вектор pET-28a(+) с последующей экспрессией в клетках E. coli. Корректность такого подхода подтверждена путем секвенирования полученной кДНК, которая показала полное (100%) совпадение с нуклеотидной последовательностью базы данных (код доступа GenBankNM_001014167)

    43

    full texts

    51

    metadata records
    Updated in last 30 days.
    Biomedical Chemistry - Research and Methods (E-Journal) is based in Russia
    Access Repository Dashboard
    Do you manage Open Research Online? Become a CORE Member to access insider analytics, issue reports and manage access to outputs from your repository in the CORE Repository Dashboard! 👇